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各種試驗用霉菌菌種的生長形態及其特征

2016-05-25 09:34:19 673

1 概述

霉菌不是一個分類學上的名詞,而是一些絲狀真菌的通稱。凡是生長在營養基質上,形成絨毛狀、蜘蛛狀或絮狀菌絲體的真菌,通稱為霉菌。

1.1霉菌的形態和菌落

1.1.1霉菌的形態特征

霉菌的生長是從孢子萌發開始的,孢子在一定溫濕度條件下,長出菌絲,隨著菌絲的生長、分枝、形成交織的菌絲體。

1.2霉菌的菌落

霉菌在培養基上生長繁殖,經過一定時間后,以菌絲聚合成群體形式出現,這就是霉菌的菌落。菌落因菌絲的粗細、組合的緊密程度、伸展的長短等差異,可出現不同的外觀形狀,如繩索狀、棉絮狀、絲戎狀、束狀等。

1.3霉菌的生長條件

霉菌生長在濕度大、溫度高的濕熱地區,它多以腐生和寄生方式生活。霉菌與其他生物一樣,在生命活動過程中與周圍環境有著密切的關系。環境條件的改變可引起霉菌的形態、生理、生長繁殖特征的改變。霉菌在適宜的環境中能旺盛生長繁殖,在惡劣的環境下會發生死亡。影響霉菌生長繁殖的因素是復雜的,多方面的,相互之間有著密切的關系。

溫度條件是霉菌試驗的一個主要條件,它幾乎影響霉菌生長的一切生理活性,每一種霉菌都只在某一特定最適宜的溫度范圍內生長旺盛。大多數霉菌最適宜生長的溫度范圍為(22~30)℃。

濕度是霉菌孢子萌發、菌絲生長的必要條件,通常當相對濕度超過70%時,孢子開始萌芽生長。當相對濕度上升到這個值以上時,霉菌的生長速度隨濕度的升高而加速。當相對濕度在(90~100)%時,生長速度達到最大極限。

霉菌試驗是環境試驗中的一項微生物環境模擬試驗,它為霉菌提供一個最佳的生長條件,其特點是由產品或材料和試驗設備共同完成。霉菌生長所需的營養物質由產品或材料提供,所需的溫度、濕度和時間等則由試驗設備提供。

霉菌試驗標準在試驗菌種的生長條件方面有嚴格的規定,規定的溫度條件有兩種:一種是恒定溫度為2 8℃、2 9℃和3 0℃ ,其容差范圍為± 1℃ ,如GB2423.16—90、IEC68—2.10、GJB4.10—83和RTCA/DO160C等標準;另一種類型是在交變溫度為(25~30)℃之間變化,其容差范圍為±1℃,如MIL—STD一810E、GJB150.10—86和HB5830.13—86等標準。在濕度要求上,一般都規定相對濕度在95%以上(除個別標準在90%以上外)。同時還提出一些與霉菌試驗有關的要求,如菌種的移植培養和保存、培養基的制備和滅菌等項內容。

2 霉菌的種類和侵蝕對象

自然界中霉菌約有10萬多種。霉菌對皮革、木材、涂料、膠粘劑、光學儀器、金屬材料等工業材料及其制品均有腐蝕破壞作用,這種侵蝕會使電子設備、武器和彈藥引起不同程度的損傷。

一般引起工業材料和制品生霉的霉腐微生物大約有113個屬、234個種,它們主要是曲霉(占霉菌總量的19.2%,以下百分比含義同),青霉(12.7%),毛霉(6.2%),木霉(4.1%),鐮刀霉(3.7%),芽枝霉(2.9%)。不同材料上的主要霉菌可以是不同的,但在某種材料上可以找到生長最旺盛的主要菌種,如棉紡織品上的主要菌種是球毛殼菌,破壞漆膜的主要菌種是出芽短梗霉等。當然也有在許多種材料上都能很好生長的霉菌,如黑曲霉、黃曲霉、雜色曲霉等。

3 霉菌試驗用菌種生長的形態特征

試驗菌種在試驗中起著重要的作用,它是霉菌試驗的必要條件之一。標準在菌種選取上考慮的是在本國和世界范圍分布廣,且比較穩定,長期以來在設備和材料上出現頻率高,對所有材料具有較強侵蝕性或對某一種材料具有較強侵蝕性的菌種。同時,還要考慮菌種之間相互對抗和變異,以及對人體危害性最小等因素。

目前,霉菌試驗最常用的菌種有2組,一組是GJB150.10—86規定的5種菌種,另一組是GB2423.16—90規定的8種菌種,共11種菌種。這些菌種的生長形態用肉眼是很難觀察到的,只有在高倍顯微鏡下才能清楚地觀察到。我們用顯微照相拍攝和收集了這1 1種菌種孢子和菌落的生長形態和特征,供大家在霉菌試驗時作為菌種鑒別的參考圖譜。

3.1各菌種的生長形態

3.1.1黃曲霉

曲霉屬的菌種,屬于黃曲霉群,在自然界分布廣泛,是我國常見霉腐菌。菌種中有些菌株能產生致癌的黃曲霉素,能在紙張、皮革、紡織品和多種電線上生長。在查氏培養基上菌落生長較快,最初帶黃色,然后變為黃綠色,老后顏色變暗,平坦或有放射狀,繼變為疏松狀,分生孢子呈球形、近球形或洋梨形。

3.1.2黑曲霉

曲霉屬的菌種,屬于黑曲霉群,在自然界分布極為廣泛,能生長在多種材料上。黑曲霉菌絲初為白色,常常出現鮮黃區域,厚絨狀,黑色。分生孢子頭幼時球形,漸變為放射形或裂成幾個放射的柱狀物。

3.1.3雜色曲霉

曲霉屬的菌種,屬于雜色曲霉群,分布于空氣、土壤中和腐敗的物體表面,在我國出現極其普遍。能產生雜色曲霉毒素,有一定毒性,能在增塑劑上生長。在查氏培養基上菌落生長局限,絨狀、絮狀或兩者同時存在。顏色變化相當廣泛,不同菌系可能局部淡綠、灰綠、淺黃甚至粉紅色,有的菌落有無色至紫紅色的液滴,分生孢子頭疏松放射狀,分生孢子梗光滑,無色或略帶黃色。

3.1.4繩狀青霉

青霉屬的菌種,在空氣、土壤、各種物品上生長,尤其是織物。菌落表面呈現繩狀、絮狀一繩狀,或偶爾稍微成簇狀,放大鏡下可見帚狀枝。顏色有綠色,或以綠色為基調色澤。

3.1.5球毛殼霉

毛殼菌屬的菌種,常見于各地土壤、各類植物種子及其他含纖維素的物質中,是典型的纖維腐蝕藺。菌落在馬鈴薯一葡萄糖瓊脂培養基上,菌絲最初呈白色,后期淡褐色,子囊殼灰褐色至澉欖褐色,中等大小,散生或聚生,卵形,子囊棒狀、透明含有8個子囊孢子不規則排列。

3.1.6土曲霉

曲霉屬的菌種,屬于土曲霉群,常在植物性材料上出現。菌落生長較快,平坦或有淺放射狀皺紋,絨狀或偶見絮狀,肉桂色至沙褐色,分生孢子球形或近球形光滑。

3.1.7綠色木霉

木霉屬的菌種,廣泛分布于自然界的土壤、肥料、木材或植物殘體中,產生纖維酶,可分解木材,擴展生長。菌落絮狀有明顯的同心環紋,同心環色澤相同,分生孢子部分綠色、菌絲部分白色,分生孢子成束。

3.1.8宛氏擬青霉

擬青霉菌屬的菌種,廣泛分布于土壤、空氣、堆肥、木材、食品分家畜飼料中。在查氏培養基上生長快,菌落蔓延初為羊毛狀,老熟后呈黃褐色略帶綠色或粉紅色,生長過渡時呈現松絮狀至繩狀質地。分生孢子結構差異極大,自單個的小梗以至復雜的多次帚狀分枝。分生孢子梗自氣生菌絲或繩狀菌絲索生出,有時沒有分生孢子梗。小梗細長漸變尖且常彎曲。分生孢子呈橢圓形或短柱形,光滑。

3.1.9赭色青霉

青霉屬的菌種,廣泛分布在空氣、土壤、各種物品上。菌落一般較小,緊密,有皺褶,輻射紋,放大鏡下可見帚狀枝。分生孢子梗頂端生有掃帚狀分枝結構,分生孢子自瓶梗上生出不分支的鏈,分生孢子區域的顏色為灰綠色。

3.1.10光孢短柄帚霉

帚霉屬的菌種,能在各種分解的有機物上生長。在麥芽汁瓊脂上生長較快,菌落薄擴散,起初呈光滑膜狀,繼之呈絨毛狀,稍有褶皺,也可呈粉末狀,色灰白漸變黃褐色至幾乎黑色。孢子頭類似青霉,但分生孢子梗很短,直接自基絲或氣絲或菌絲素分支上生出,此后再進一步形成簡單或復雜的帚狀分支系統,最終形成環狀孢子梗和分生孢子,分生孢子為梨形,鏈狀,壁厚,表面粗糙。

3.1.1l出芽短梗霉

短梗霉屬的菌種,在自然界分布廣泛。在查氏瓊脂培養基上生長良好,菌落早期粘稠為臟白色,不久變為臟綠色,最終成為黑色,有皺褶并發亮,皮革狀。色澤變化由中央向邊緣擴展,邊緣有時可帶白色環。新生菌絲壁較簿,細而無色透明,橫隔少,老齡菌絲壁厚,色由暗轉變黑。菌絲彎曲有隔,可以橫裂形成芽管再發芽。分生孢子產生于菌絲的乳頭狀突起上,橢圓形。

3.2霉菌試驗標準對試件上霉菌生長形態的等級劃分

霉菌試驗標準對于試件長霉等級的劃分,是根據霉菌在試件的生長形態和所覆蓋的面積進行評判。大致分為4或5個等級,試驗標準長霉評定表可以看出,GJB 150.10—86等級評判表規定得詳細而具體,5個等級劃分的范圍比較合理,但對于“材料基質呈物理、化學及結構的變化及被霉菌分解或迅速變質”的評判規定不太恰當,因為霉菌生長時所吸收營養物質的量很少,在短期內很難使材料發生物理和化學的變化,并被霉菌分解和迅速變質。在霉菌試驗的28天,甚至84天,我們也未發現材料出現此類的變化,而在最新版本的MIL—STD一8 l OF中已將“材料基質呈物理、化學的變化及被霉菌分解或迅速變質”刪除。

對于GB2423.16—90和IEC一68—2—10的4個等級評判的規定,范圍小、要求嚴,但過于簡單,僅對觀察長霉與否及面積進行等級劃分,未有描繪霉菌生長形態的規定。

4 霉菌試驗對試驗菌種的相關要求

霉菌試驗標準對菌種的購買、純度、活力、接種繁育、保存和孢子懸浮液的配制,以及培養和滅菌等提出了具體的要求和規定。

4.1霉菌菌種的采購、培養和保存

試驗菌種應來自國家級專門培養的部門,購買時菌種的菌號要相同,使用時要用在溫度為(28~30)℃培養14~21天的菌種。

試驗菌種在斜面培養基試管中培養和保存,為了保證菌種特性的穩定和所需的營養采用查氏合成瓊脂培養基和馬鈴薯葡萄瓊脂培養基交替培養的方式。試驗菌種應在5℃~10~C的冰箱中貯存,一般可保存1~3個月后再移種一次,每種菌種至少應貯備兩只菌管,菌種應當保持純種狀態,若有污染應立即進行分離純培養。

試驗前應對試驗菌株逐株進行檢驗,不得使用不純變異或超過培養或保存時間的菌種。

4.2試驗菌種的增減

根據材料受霉菌損害的經驗和知識,在霉菌試驗中可增減試驗菌種,但必須做出詳細說明,并在試驗記錄中予以注明。

4.3試驗菌種培養時采用的滅菌方式

菌種培養接種時采用在酒精燈上火焰滅菌,在接種過程中,試管口采用通過火焰而達到滅菌的目的。培養基和接種液采用高壓蒸汽進行滅菌,滅菌后注意排氣不能過快,待壓力恢復到零位時再打開鍋蓋,取出滅菌物品。

另外,應注意凡在接菌、培養基制備和孢子懸液的配制時,所需要用的物品和器具都要經過滅菌后才能使用。

5 結束語

由于霉菌的分生孢子具有不同的顏色,菌落也由此出現各種顏色,還有的能分泌色素,使培養基帶有顏色,而且同一種霉菌在不同成分培養基形成的菌落特征可能發生變化,因此,存在同一種霉菌在不同培養基上出現不同顏色的現象。我們在霉菌菌種鑒定時要考慮到這一因素。但各種霉菌在一定培養基形成的菌落形狀、大小、顏色等是相對穩定的,這是鑒定霉菌的重要依據之一。

另外,在霉菌試驗中保證菌種的活力是非常重要的。在反復培養中發現長勢不好,并有退化現象的菌種仍作為試驗菌種,將會影響試驗結果。因此,應經常定期更換菌種,從有關菌種保藏機構或鑒定中心索取已培養成熟的菌種作為試驗菌種。

總之,霉菌菌種在試驗中起著重要的作用,菌種的形態和特征是鑒別菌種的依據,同時也是保證試驗結果準確性和再現性的因素


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