化妝品防腐效能試驗檢測——CFFA方法

2017-01-18 10:32:21 天緯化學

列出了用于化妝品防腐效能試驗中的常用微生物，其中包括了與眼部有聯系的細菌，這些細菌是從眼部區域天然存在的微生物區系，或從臨床上分離出來的，或從污染的產品中分離獲得的。防腐效能試驗中常用的細菌培養基包括NA、TSA(水解大豆瓊脂培養基）、EA(瓊脂培養基）。適宜于真菌生長的培養基包括SDA(糊精瓊脂培養基）、PDA(馬鈴薯瓊脂培養基）或MA(瓊脂培養基）。當菌體生長好后，可將細菌或酵母菌于5℃下斜面保存，霉菌可在室溫下斜面保存。每隔一定時間（一周或一個月）進行傳代來保持菌種的生存，但頻繁傳代會使菌種的某些特性丟失或減弱微生物的抗性，冷藏或冷凍干燥保存微生物是一種取代斜面保存的方法，因為它克服了頻繁傳代的缺點，保證了遺傳性狀的穩定性。還應注意的是在沒有選擇壓力的情況下由于頻繁傳代抗性更易喪失。在含有防腐劑的化妝品中分離出來的微生物，可能仍然保留著對防腐劑的抵抗力。

在準備接種物時，可以用肉湯或瓊脂培養基培養細菌和酵母菌，收獲的菌體用于微生物檢驗。在進行微生物檢驗時，一般取20g或20ml樣品，微生物的接種濃度控制在1×10cfu細菌ml（或g）產品，或1×10cfu酵母菌ml（或g）產品。為了獲得每種或每一類群微生物的試驗數據，CTFA傾向于使用純培養物或相當類似的微生物來接種，體積不應超過總體積的1%，這些檢驗水平提供了比通常消費者使用可能性更高的細菌污染機會。加之，在產品設計時許多產品還有保護性體系，即加入略多一些的防腐劑，因此，大多數經檢驗后確定的防腐劑濃度保證了產品可以在消費者使用期間抵抗污染，而且比它們的一般要求嚴格得多。樣品一旦接種，實驗人員就會將其與被測產品徹底混合，同時，取出樣品在適宜的中和性肉湯中稀釋，從而使防腐劑失去效力。大多數方法采用1g或1ml混合物傾注平板培養。有些實驗室使用選擇

性平板涂布方法來估計微生物的數量。那些對溫度敏感的微生物則可采用涂布的方法、一般來講細菌的培養溫度為32℃--35℃真菌采用25℃--30℃培養。多數試驗方法（CTFA,USP,ASTM等）推薦混合測試的樣品分別于0、1、2、3天（僅用于眼部的化妝品）、7、14和28天觀察微生物的生長情況。有些檢驗可能多于28天，這依賴于其所期望的使用范圍。有些產品還進行重復性的防腐試驗來估計防腐劑在產品中的適應性，用某一特定的微生物防腐試驗可以得出使防腐系統失去效力所需的檢驗次數。CTFA所推薦的含有中和劑的稀釋培養基有：LBL,LBLT,TGB或WB.當使用傾注平板法培養時，加入培養基中的卵磷脂或吐溫—80就可以中和絕大多數的防腐劑，并使產品均勻分布，對細菌、酵母和真菌來講，letheen.瓊脂培養基是最常使用的培養基，這種培養基還適用于厭氧菌的生長，對于中和季銨鹽類化合物十分有效。其他的CTFA推薦的培養基有：TSA（大豆酪蛋白水解物培養基），NA（營養瓊脂），TA(硫代乙醇酸瓊酯），混合瓊脂（腦、心、小牛肉的混合物），EA，TGYEA(胰胨B葡萄糖B酵母提取物瓊脂），TCG-YEA(胰蛋白酶水解物B葡萄糖B酵母提取物瓊脂，D-E培養基，以及TSAPL(含卵磷脂和吐溫80的胰蛋白酶大豆水解瓊脂）；其他還有使真菌富集的培養基，如右旋葡萄糖瓊脂，Mycophil瓊脂，Mycological瓊脂和Eugon-gar。當劃線培養時，中和劑和瓊脂培養基相混，多數使用的是lb瓊脂培養基，如果防腐劑是汞或其他重金屬，則應采用硫代乙醇酸的培養基。

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