1.1 實驗儀器和材料

       實驗儀器包括高壓滅菌器,電子天平,pH計,溫度計,無菌操作臺,生化培養箱,恒溫振動儀,離心機,移液槍,電子顯微鏡,培養皿若干,錐形瓶若干,封口紙,酒精燈,接種環等。航空煤油樣品取自天津濱海國際機場航空煤油廢棄罐底部,航空煤油呈棕黃色渾濁狀態。由于航空煤油中主要含有細菌和真菌,因此,本實驗主要研究真菌和細菌的分離和鑒定。本實驗分離微生物時采用的是固體培養基,其中1L真菌培養基的組成如下:硝酸鈉3.0090g,硫酸亞鐵0.0120g,磷酸氫二鉀1.0242g,蔗糖30.1209g,硫酸鎂0.5628g,瓊脂粉20.0892g,向培養基中加入少量稀硝酸,使pH值調至6.8左右。1L細菌固體培養基組成如下:牛肉膏5.6561g,蛋白胨10.0243g,氯化鈉5.0990g,瓊脂粉21.2350g,加入少量氫氧化鈉溶液,使pH值調至7.2左右。本實驗富集微生物時采用液體培養基,只需把瓊脂粉劑量減半即可。

1.2.實驗方法

1.2.1 航空煤油中微生物的富集、分離和鑒定

1)微生物富集

在高壓蒸汽滅菌器內調節表壓大約為0.1MPa,溫度為121 ,將培養基滅菌20min左右,并且在無菌操作下倒入培養皿內,待溫度適宜后開始微生物的富集培養。富集真菌時,加入80%(體積分數)的乳酸溶液數滴,以抑制細菌生長。

2)分離

將富集后的真菌采用倍數稀釋法進行分離,富集時在液體培養基中進行,分離時采用固體培養基,便于微生物菌落的觀察和挑取[7]。

3)生長實驗

將富集分離后得到的純種微生物菌株用接種環在無菌條件下接種到滅菌后的無機鹽固體培養基上,加入滅菌標準航空煤油作為唯一碳源,在生化培養箱內于恒溫32 進行培養,觀察菌株能否在唯一碳源培養基上生長。若生長,則表明該菌株為能在航空煤油中生長的菌株;反之,則表明該菌株可能是在操作過程中的污染菌株。將能在唯一碳源培養基上生長的菌株保存,以備鑒定。1.2.2