化妝品防腐效能試驗檢測——CFFA方法
2017-01-18 10:32:21
天緯化學(xué)
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列出了用于化妝品防腐效能試驗中的常用微生物，其中包括了與眼部有聯(lián)系的細(xì)菌，這些細(xì)菌是從眼部區(qū)域天然存在的微生物區(qū)系，或從臨床上分離出來的，或從污染的產(chǎn)品中分離獲得的。防腐效能試驗中常用的細(xì)菌培養(yǎng)基包括NA、TSA(水解大豆瓊脂培養(yǎng)基）、EA(瓊脂培養(yǎng)基）。適宜于真菌生長的培養(yǎng)基包括SDA(糊精瓊脂培養(yǎng)基）、PDA(馬鈴薯瓊脂培養(yǎng)基） 或MA(瓊脂培養(yǎng)基）。當(dāng)菌體生長好后，可將細(xì)菌或酵母菌于5℃下斜面保存，霉菌可在室溫下斜面保存。每隔一定時間（一周或一個月）進(jìn)行傳代來保持菌種的生存，但頻繁傳代會使菌種的某些特性丟失或減弱微生物的抗性，冷藏或冷凍干燥保存微生物是一種取代斜面保存的方法，因為它克服了頻繁傳代的缺點，保證了遺傳性狀的穩(wěn)定性。還應(yīng)注意的是在沒有選擇壓力的情況下由于頻繁傳代抗性更易喪失。在含有防腐劑的化妝品中分離出來的微生物，可能仍然保留著對防腐劑的抵抗力。
在準(zhǔn)備接種物時，可以用肉湯或瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)菌和酵母菌，收獲的菌體用于微生物檢驗。在進(jìn)行微生物檢驗時，一般取20g或20ml樣品，微生物的接種濃度控制在1×10cfu細(xì)菌ml（或g）產(chǎn)品，或1×10cfu酵母菌ml（或g）產(chǎn)品。為了獲得每種或每一類群微生物的試驗數(shù)據(jù)，CTFA傾向于使用純培養(yǎng)物或相當(dāng)類似的微生物來接種，體積不應(yīng)超過總體積的1%，這些檢驗水平提供了比通常消費者使用可能性更高的細(xì)菌污染機會。加之，在產(chǎn)品設(shè)計時許多產(chǎn)品還有保護(hù)性體系，即加入略多一些的防腐劑，因此，大多數(shù)經(jīng)檢驗后確定的防腐劑濃度保證了產(chǎn)品可以在消費者使用期間抵抗污染，而且比它們的一般要求嚴(yán)格得多。樣品一旦接種，實驗人員就會將其與被測產(chǎn)品徹底混合，同時，取出樣品在適宜的中和性肉湯中稀釋，從而使防腐劑失去效力。大多數(shù)方法采用1g或1ml混合物傾注平板培養(yǎng)。有些實驗室使用選擇
性平板涂布方法來估計微生物的數(shù)量。那些對溫度敏感的微生物則可采用涂布的方法、一般來講細(xì)菌的培養(yǎng)溫度為32℃--35℃真菌采用25℃--30℃培養(yǎng)。多數(shù)試驗方法（CTFA,USP,ASTM等）推薦混合測試的樣品分別于0、1、2、3天（僅用于眼部的化妝品）、7、14和28天觀察微生物的生長情況。有些檢驗可能多于28天，這依賴于其所期望的使用范圍。有些產(chǎn)品還進(jìn)行重復(fù)性的防腐試驗來估計防腐劑在產(chǎn)品中的適應(yīng)性，用某一特定的微生物防腐試驗可以得出使防腐系統(tǒng)失去效力所需的檢驗次數(shù)。CTFA所推薦的含有中和劑的稀釋培養(yǎng)基有：LBL,LBLT,TGB或WB.當(dāng)使用傾注平板法培養(yǎng)時，加入培養(yǎng)基中的卵磷脂或吐溫—80就可以中和絕大多數(shù)的防腐劑，并使產(chǎn)品均勻分布，對細(xì)菌、酵母和真菌來講，letheen.瓊脂培養(yǎng)基是最常使用的培養(yǎng)基，這種培養(yǎng)基還適用于厭氧菌的生長，對于中和季銨鹽類化合物十分有效。其他的CTFA推薦的培養(yǎng)基有：TSA（大豆酪蛋白水解物培養(yǎng)基），NA（營養(yǎng)瓊脂），TA(硫代乙醇酸瓊酯），混合瓊脂（ 腦、心、小牛肉的混合物），EA，TGYEA(胰胨B葡萄糖B酵母提取物瓊脂），TCG-YEA(胰蛋白酶水解物B葡萄糖B酵母提取物瓊脂，D-E培養(yǎng)基，以及TSAPL(含卵磷脂和吐溫80的胰蛋白酶大豆水解瓊脂）；其他還有使真菌富集的培養(yǎng)基，如右旋葡萄糖瓊脂，Mycophil瓊脂，Mycological瓊脂和Eugon-gar。當(dāng)劃線培養(yǎng)時，中和劑和瓊脂培養(yǎng)基相混，多數(shù)使用的是lb瓊脂培養(yǎng)基，如果防腐劑是汞或其他重金屬，則應(yīng)采用硫代乙醇酸的培養(yǎng)基。
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